【摘要】：目的 評價湖南樂準生物科技有限公司（以下簡稱樂準公司）的腦利鈉肽（以下簡稱BNP）檢測試劑（磁微?；瘜W發(fā)光法）的性能。方法 對檢測試劑盒的空白限、檢出限、線性范圍、正確度、精密度、抗干擾性、與參比試劑的相關(guān)性及陰陽性符合率進行評價。結(jié)果 試劑盒空白限實測0.64 pg/ml，檢出限5 pg/ml； 線性范圍為5.0-5000.0 pg/ml，相關(guān)系數(shù)為 0.999；正確度參考品測試結(jié)果在靶值的95%置信區(qū)間之內(nèi)；精密度小于10%；樣本中血紅蛋白<5.00 g/L，膽紅素<0.2 g/L，甘油三酯<30.0 g/L，氨基末端腦利鈉肽前體＜1000 pg/ml時，對本試劑的檢測無顯著影響。測試164人份的血漿標本，它與貝克曼-B型鈉尿肽參比試劑比對結(jié)果相關(guān)性r=0.9841；經(jīng)Bland-Altman分析，計算得到P=0.0125<0.05，兩檢測系統(tǒng)測量值有差異；陰陽性符合率統(tǒng)計顯示陽性符合率100%，陰性符合率97.18%，總符合率98.78%。 結(jié)論 樂準生物公司腦利鈉肽（BNP）試劑檢測時間為15分鐘，試劑的空白限、檢出限、線性范圍、正確度、精密度、抗干擾符合實驗室質(zhì)量標準要求；它與貝克曼-B型鈉尿肽參比試劑相比，兩系統(tǒng)檢測結(jié)果相關(guān)性良好，但測量值有差異，樣本陰陽性符合率一致，基本能夠滿足臨床檢測需求。

腦利鈉肽是一種激素，可對血壓進行調(diào)節(jié)。對人體來說，腦利鈉肽主要由心臟產(chǎn)生，是隨著心臟壓力的增高而釋放的。多項研究顯示BNP測定項目在臨床應(yīng)用的范圍較廣，包括診斷、監(jiān)測和預(yù)后[1-3]。BNP的循環(huán)水平隨著左室功能下降和日趨嚴重的心衰臨床癥狀而升高，進行BNP測定可診斷心衰 并根據(jù)NYHA的分級對其定級[4-6]。已有其他研究表明較高的BNP循環(huán)水平與心臟病發(fā)生率和心衰[7-8]及急性冠脈綜合征[9]患者死亡率的升高有關(guān)，并認為可采用BNP作為患者預(yù)后的一項指標。因此，腦利鈉肽是一個很好的反映心功能的指標，具有重要的病理生理學意義。

本試劑盒采用雙抗體夾心化學發(fā)光免疫分析法與磁微粒分離技術(shù)相結(jié)合的檢測方法。試劑中兩種鼠抗BNP單克隆抗體分別被ALP、FITC標記，可與樣本中的分析物反應(yīng)形成ALP標記抗體-抗原-FITC標記抗體的雙抗體夾心復(fù)合物，加入磁分離劑（含有與鼠抗FITC抗體結(jié)合的磁微粒）后，復(fù)合物與磁珠結(jié)合，然后加載磁場使復(fù)合物吸附在反應(yīng)容器內(nèi)，使用清洗液洗去游離酶標抗體，最后再加入發(fā)光底物，復(fù)合物中的ALP催化底物產(chǎn)生化學發(fā)光，其相對發(fā)光值（RLU）在一定范圍內(nèi)與復(fù)合物濃度成正比，根據(jù)校準曲線計算得出待測樣本的BNP含量。

一、研究材料與方法

1.標本來源：測試使用的164份血漿標本均來自上海市同濟醫(yī)院。全血的抽取、血漿的分離以醫(yī)院使用的標準方法進行采集。

2.儀器與試劑:（1）評價用試劑和部分樣品為湖南樂準生物科技有限公司生產(chǎn)：腦利鈉肽（BNP）測定試劑盒（磁微粒化學發(fā)光法），批號為20230823；BNP校準品，批號為20230217；BNP質(zhì)控品，批號為20230217；BNP正確度參考品，批號為20230627；BNP空白限樣品，批號為20230627；BNP檢測限樣品，批號為20230627；BNP線性樣品，批號為20230627；BNP精密度樣品，批號20230106。檢測系統(tǒng)-全自動化學發(fā)光免疫分析儀-9000i，湖南樂準生物科技有限公司。（2）干擾物：血紅蛋白，購自西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，批號SLCJ0443，膽紅素，購自北京百靈威科技有限公司，批號L390S62；甘油三酯，購自費森尤斯卡比華瑞制藥, 批號80NH005；氨基末端腦利鈉肽前體(NT-proBNP)，購自海肽生物科技（上海）有限公司, 批號23/03-8NT2。（3）參比試劑：B型鈉尿肽檢測試劑盒（雙抗夾心免疫酶法），Beckman Coulter公司，BNP Triag批號為338053。參比檢測系統(tǒng)為貝克曼全自動化學發(fā)光免疫分析儀-UniCel DxI800。

二、評價方法

1.空白限：依據(jù)《體外診斷試劑分析性能評估系列指導(dǎo)原則（征求意見稿）》[10]驗證空白限。用零濃度校準品作為樣本進行檢測，重復(fù)測定20次，得出20次測量結(jié)果的RLU值（相對發(fā)光值），計算其平均值（`X）和標準差（SD），得出（`X ）+2SD，根據(jù)零濃度校準品和相鄰校準品之間的濃度-化學發(fā)光（RLU）值結(jié)果進行兩點回歸擬合得出一次方程，將（`X ）+2SD所對應(yīng)的RLU值帶入上述方程中，求出對應(yīng)的濃度值，即為空白限。

2.檢出限：依據(jù)《YY T 1451-2016腦利鈉肽和氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑（盒）（定量標記免疫分析法）》[11]驗證檢出限。用樂準生物提供的5份濃度近似檢出限（廠家說明書規(guī)定：5.00 pg/ml）的低值樣本進行檢測每份樣本檢測5次，對檢測結(jié)果按照大小進行排序，低于空白限的檢測結(jié)果（廠家技術(shù)要求規(guī)定：2.00 pg/ml）的數(shù)量應(yīng)小于或等于3個。

3.線性范圍：依據(jù)《YY T 1451-2016腦利鈉肽和氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑（盒）（定量標記免疫分析法）》驗證線性。將接近線性區(qū)間上限的高值樣本和接近線性區(qū)間下限的低值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，本次實驗分別準備4.0 pg/ml、100.0 pg/ml、500.0 pg/ml、1250.0 pg/ml、2500.0 pg/ml、5000.0 pg/ml6種不同濃度樣本，按試劑盒說明書進行操作，對每一濃度的樣本均重復(fù)檢測3次，計算其平均值。將結(jié)果平均值和理論濃度用最小二乘法進行直線擬合，并計算線性相關(guān)系數(shù)|r|。

4.正確度實驗方法：依據(jù)《WS_T 492-2016 臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》[12] 驗證正確度。用樂準生物提供的正確度參考品重復(fù)測定2次，連續(xù)測定5天，計算均值和標準差，以及置信區(qū)間幫助驗證指定值，參考品的靶值均在95%置信區(qū)間和驗證區(qū)間之內(nèi)。

5.精密度實驗方法：依據(jù)《WS_T 492-2016 臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》驗證精密度。樂準生物提供的BNP精密度樣品，包含高、中、低值3個濃度水平，每個樣品重復(fù)測定3次，連續(xù)測定5天，如果因為質(zhì)量控制程序或者操作問題判斷一批為失控，應(yīng)剔除數(shù)據(jù)，并增加執(zhí)行一個分析批。計算實驗室內(nèi)標準差和實驗室變異系數(shù)，變異系數(shù)應(yīng)小于10%。

6.干擾實驗：依據(jù)《定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》[13]驗證干擾。以廠家提供的血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、氨基末端腦利鈉肽4個干擾物原液，分別取已有測值的高（2000-5000 pg/ml）、低（100-500 pg/ml）濃度血漿樣本，每個水平血漿樣本分別添加不同的干擾物原液制備對應(yīng)的待測樣本： 5.00g/L血紅蛋白，0.2 g/L膽紅素，30.0 g/L甘油三酯，1000 pg/ml氨基末端腦利鈉肽前體4種干擾待測物樣本，干擾前、干擾后各檢測 3 次，取均值計算干擾率，判斷本試劑盒的檢測是否會受到以上4 種物質(zhì)的干擾。

7.比對實驗：依據(jù)《YY T 1451-2016腦利鈉肽和氨基末端腦利鈉肽前體檢測試劑（盒）（定量標記免疫分析法）》和EP09-A2[14]進行樣本比對評價，使用164份血漿標本，比對試劑與參比試劑采用盲法操作，操作步驟及方法嚴格按照各自的產(chǎn)品說明書要求進行。采用SPSS統(tǒng)計軟件，對試驗數(shù)據(jù)進行線性回歸統(tǒng)計分析，計算相關(guān)系數(shù)R，判斷檢測結(jié)果是否線性相關(guān)；采用Medcale統(tǒng)計軟件，對試驗數(shù)據(jù)進行Bland-Altman分析，計算檢測結(jié)果是否有差異；以100 pg/ml為陰陽性界定值，將實驗數(shù)據(jù)進行陰陽性符合率統(tǒng)計，綜合評價本試劑盒與貝克曼BNP產(chǎn)品的相關(guān)性和符合性。

三、結(jié)果與分析

1.空白限：空白限樣品（即零濃度度校準液）重復(fù)測定20次，實驗結(jié)果空白限為0.64 pg/ml，見表1。

表1 空白限

2.檢出限：用樂準生物提供的5份濃度近似檢出限（廠家說明書規(guī)定：5.00 pg/ml）的低值樣本進行檢測，結(jié)果表明，低于空白限（廠家技術(shù)要求規(guī)定：2.00 pg/ml）的檢測結(jié)果的數(shù)量為零，見表2。 

表2 檢出限

3.線性范圍:在濃度為4.0~5000.0 pg/ml范圍內(nèi)，產(chǎn)品線性關(guān)系良好，回歸方程分別為y = 1.04x - 4.3189，R = 0.9999，見圖1。 

圖1  線性相關(guān)圖

4.正確度:用樂準生物提供的正確度參考品重復(fù)測定2次，連續(xù)測定5天，2個正確度參考品的靶值均在95%置信區(qū)間和驗證區(qū)間之內(nèi)，見表3-4。

表3正確度參考品1

表4正確度參考品2 

5.精密度:用樂準生物提供的BNP精密度樣品重復(fù)測定3次，連續(xù)測定5天，3個不同濃度水平的BNP精密度樣品的實驗室變異系數(shù)均小于10%，見表5-7。 

表5精密度樣品1

表6精密度樣品2 

表7精密度樣品3

6.干擾實驗:每個濃度干擾物對結(jié)果的干擾率均小于15%，無顯著性差異，見表8-9。

表8 低值樣本干擾

表9高值樣本干擾 

7.比對實驗:（1）線性相關(guān)性結(jié)果：兩種試劑共同對 164 份血漿樣本分別檢測，在檢測范圍5.0-5000.0 pg/ml，用 SPSS 軟件統(tǒng)計。如圖 2 所示，計算得到線性回歸方程：y = 0.9895x + 33.566，R = 0.9841，相關(guān)系數(shù) R=0.9841＞0.975，兩種腦利鈉肽（BNP）試劑檢測結(jié)果線性相關(guān)。（2） 采用Medcale統(tǒng)計軟件對兩種試劑檢測值進行Bland-Altman分析，計算得到P=0.0125<0.05，兩試劑檢測系統(tǒng)結(jié)果有顯著差異，見圖3。

圖2 樂準血漿與貝克曼血漿比對線性相關(guān)圖

圖3  兩種試劑測值的Bland-Altman圖

（3）樣本陰陽性一致率：164例血漿樣本，以100 pg/ml為陰陽性界定值進行符合率統(tǒng)計，陽性符合率100%，陰性符合率97.18%，總符合率98.78%，見表10

表10 樣本陰陽性符合率分析

（4）異常樣本分析：本次評價過程中，本試劑與參比試劑出現(xiàn)4例樣本測值異常，見表11，經(jīng)過復(fù)測分析：參比試劑第1次測值呈陽性，第2次復(fù)測均為陰性；同樣的4例樣本，本試劑兩次測試結(jié)果均為陰性。 

表11異常樣本分析

四、結(jié)論 

樂準生物公司的腦利鈉肽（BNP）檢測試劑（磁微?；瘜W發(fā)光法），同時支持全血測試，檢測時間為15分鐘。檢測空白限為0.64 pg/ml；檢出限滿足5 pg/ml；精密度評價變異系數(shù)小于10%；檢測線性范圍在5.0~5000.0 pg/ml，線性相關(guān)系數(shù) R為0.9999，能夠滿足臨床需要。使用血漿樣本與貝克曼B型鈉尿肽檢測試劑盒（雙抗夾心免疫酶法）比對結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)為R= 0.9841，檢測結(jié)果有良好的線性相關(guān)性。但是對兩系統(tǒng)測量值進行Bland-Altman分析，計算得到P=0.0125<0.05，說明兩系統(tǒng)測量值有差異，對經(jīng)陰陽性符合率統(tǒng)計，結(jié)果顯示陽性符合率100%，陰性符合率97.18%，總符合率98.78%，樣本陰陽性有良好的一致性。評價過程中發(fā)現(xiàn)本試劑與參比試劑出現(xiàn)4例樣本測值異常，貝克曼兩次重復(fù)測試結(jié)果相反，需分析原因，樂準生物的兩次測試結(jié)果一致。綜上所述樂準生物公司的腦利鈉肽（BNP）檢測試劑基本滿足臨床質(zhì)量要求。

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